Принцип исследования твердофазный иммуноферментный анализ в 96 луночном планшете

Обновлено: 07.07.2024

Всем известно, что лечению любого заболевания предшествует диагностика. Чем раньше и точнее поставлен диагноз, тем больше шансов на успешное и полное излечение пациента. О том, что представляет собой такой анализ, как ИФА, кому он назначается и как «работает», рассказывает врач-детский инфекционист «Клиника Эксперт» Тула Елена Геннадьевна Королёва.

— Елена Геннадьевна, ИФА-анализ крови — что это такое? Расскажите о его принципе.

— С помощью иммуноферментного анализа (сокращённо ИФА) происходит выявление в крови специфических антител, представляющих собой молекулы иммуноглобулинов (часто обозначаются так: Ig). Антитела вырабатываются иммунной системой организма в ответ на внедрение в него чужеродных агентов — например, вирусов, бактерий. То есть этот анализ показывает реакцию организма на инфекцию, которая была у человека или присутствует в настоящее время. Это так и называется: ИФА-анализ на антитела. Самих возбудителей болезни, их антигены, с помощью этого вида анализа не найти.

«Каковы отличия вирусов и бактерий, и какое это имеет значение при лечении инфекционных заболеваний?».
Цитата из материала «Вирусы и бактерии — в чём принципиальное отличие?»

Есть несколько классов иммуноглобулина, которые образует иммунная система. Они вырабатываются в зависимости от срока внедрения патогена в организм и по-разному называются. Например, наличие иммуноглобулина класса M (IgM) свидетельствует об острой фазе инфекционного процесса — значит, человек болен именно в этот конкретный момент. А вот иммуноглобулин G (IgG) начинает вырабатываться после двух недель борьбы организма с инфекцией. Если присутствуют оба типа, это говорит о том, что инфекция протекает уже относительно длительное время, но острая фаза пока ещё не закончилась. Но в случае, когда присутствует хроническая инфекция, появление IgМ может говорить о её обострении и течении острой фазы на фоне хронического процесса.

Хотите подробнее узнать об иммунной системе? Читайте нашу статью

— Когда назначается иммуноферментный анализ? Метод используется только для диагностики инфекций?

— Метод ИФА назначается, если врач заподозрил у пациента не явную, скрытую инфекцию, и её предстоит выявить. Ещё этот метод выступает в роли скрининга после прививок: он применяется, когда необходимо определить, есть ли у человека защита, скажем, от кори или иных инфекционных заболеваний — то есть анализ показывает, имеются ли антитела к тем или иным инфекциям, надо этого человека прививать или нет.

Читайте материалы по теме:

— Что может выявить ИФА крови?

— Если лаборатория обладает определёнными возможностями, иммуноферментный анализ может выявить абсолютно любую инфекцию. Например, разработан ИФА анализ крови на паразиты (в том числе на гельминты), на герпес, гепатит и многие другие инфекционные патогены. Для выполнения теста нужно соответствующее оборудование, скрининговые программы. Но есть и ещё один существенный момент. Современные лабораторные анализаторы устроены так, что одному человеку ИФА не делается, т. е. необходимо ждать, когда пациентов, которым надо сделать такой же анализ, наберётся определённое количество, только тогда лаборатория возьмётся за эту работу. Например, для выявления ветряной оспы какой-то лаборатории нужны как минимум 50 человек. И это зависит не от прихоти её сотрудников — дело в том, что для лаборатории рентабельнее делать именно несколько анализов одновременно. Поэтому, чтобы меньше ждать, лучше обращаться в крупные лаборатории с большой проходимостью пациентов.

— Насколько чувствителен иммуноферментный анализ? Есть ли вероятность того, что он не обнаружит свою «цель», в то время как она в организме есть? И если да, то почему такое может быть?

— Если под целью подразумевать сам вирус, то, повторю, ИФА это не делает, его задача — обнаружить именно реакцию организма на инфекцию, специфические антитела к патогену. Если же под целью понимаются антитела, то, к сожалению, бывает и так, что ИФА их не обнаруживает. Результат может оказаться как ложноположительным, так и ложноотрицательным. Например, у беременных женщин со второй группой крови зачастую получают ложноположительный анализ на гепатит С. Т.е. на самом деле никаких антител к вирусу гепатита С в организме этой женщины нет, а анализ говорит об обратном. Увы, современная медицина затрудняется объяснить это. Поэтому, если врач наблюдает явные симптомы, видит, что человек болен, но при этом полученные результаты ИФА отрицательны, надо идти дальше и назначать другой, более специфичный анализ.

Кстати, ложноположительный результат на гепатит С может получиться и в случае, если накануне сдачи анализа человек выпил красного вина. В подобных случаях очень многое зависит от опыта врача, и ему решать, верить результатам анализа или продолжать исследования.

Подробнее о гепатите С читайте в нашей статье

— Есть ещё один современный анализ, известный как ПЦР — полимеразная цепная реакция. Она не может заменить иммуноферментный анализ? Если нет, то почему?

— Знаете, для инфекциониста это звенья одной цепи, одного процесса. В отличие от ИФА, ПЦР выявляет непосредственно ДНК или РНК самого вируса или бактерии. Но здесь одна особенность. Брать секрет нужно непосредственно из очага поражения — оттуда, где этот вирус или бактерия размножается. Скажем, гепатиты или ВИЧ — да, их можно обнаружить с помощью ПЦР, взяв у больного кровь. А вот если у человека пневмония, вызванная каким-то экзотическим грибком, анализ крови покажет отрицательный результат, и надо брать мокроту непосредственно из лёгких посредством бронхоскопии. Если речь идёт о других органах — скажем, о печени, — проводится биопсия.

Кроме того, ПЦР может показать ложноположительный результат, отреагировав на какие-то «обломки» молекул вируса — при том, что самого вируса, инфекции как таковой в организме уже может не быть. То есть противопоставлять эти два метода диагностики нельзя. ИФА и ПЦР неразрывно связаны между собой и дополняют друг друга, сводя к минимуму риск постановки неверного диагноза.

Беседовал Игорь Чичинов

Редакция рекомендует:

Для справки

Королёва Елена Геннадьевна

В 1992 г. окончила педиатрический факультет Киргизского государственного медицинского института.

С 1992 по 1993 г. — интернатура по детской инфекции.

Работала в республиканской инфекционной больнице (г. Бишкек) детским инфекционистом. Затем — реаниматолог в отделении интенсивной терапии для инфекционных больных.
В Туле более 10 лет работала в областной детской больнице, 7 лет заведовала отделением реанимации.

В настоящее время — врач, детский инфекционист, детский анестезиолог-реаниматолог «Клиники Эксперт» Тула. Принимает по адресу: г.Тула, ул. Болдина,74.

Иммуноферментный анализ (ИФА) — один из видов иммунохимического анализа. Он основан на высокоспецифической иммунологической реакции антигена (АГ) с соответствующим антителом (АТ) с образованием иммунного комплекса. При этом один из компонентов конъюгирован с ферментом. В результате реакции фермента с хромогенным субстратом образуется окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.

Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии:

Стадия узнавания исследуемого соединения специфическим антителом;
Стадия формирования связи конъюгата с иммунным комплексом или со свободными местами связывания;
Стадия превращения ферментной метки в регистрируемый сигнал.

В реакции участвуют:

Твердая фаза;
АГ и АТ;
Конъюгат (антиген или антитело, меченые ферментом);
Ферментный маркер;
Субстрат;
Стоп-реагент (чаще всего применяют серную кислоту).

Твердая фаза

В качестве твердой фазы для проведения ИФА можно применять различные материалы: полистирол, поливинилхлорид, полипропилен и другие. Твердой фазой могут служить стенки пробирки, 96-луночные и др. планшеты, шарики, бусины, а также нитроцеллюлозные и другие мембраны, активно сорбирующие белки.

Антигены и антитела

АГ и AT, используемые в ИФА, должны быть высокоочищенными и высокоактивными. АГ должны обладать высокой антигенностью, оптимальной плотностью расположения и количеством антигенных детерминант.
Чувствительность ИФА зависит от концентрации, активности и специфичности используемых антител. Используемые АТ могут быть поли- или моноклональными, различного класса (IgG или IgM) и подкласса (IgG1, IgG2).
Чувствительность и специфичность метода повышается при использовании моноклональных антител. В этом случае появляется возможность обнаруживать низкие концентрации АГ (AT) в образцах.

Ферментные маркеры: наибольшее применение нашли пероксидаза хрена (ПХ), щелочная фосфатаза (ЩФ) и β-D-галактозидаза.

Субстраты

Выбор субстрата, в первую очередь, определяется используемым в качестве метки ферментом, так как реакция «фермент-субстрат» высокоспецифична.

Для ПХ в качестве субстрата используют 3,3’,5,5’-тетраметилбензидин (ТМБ хромоген). Происходит цветная реакция, интенсивность которой зависит от количества связанного определяемого вещества;
Для ЩФ субстратом является 4-нитрофенилфосфат;
β-D-галактозидаза катализирует гидролиз лактозы с образованием глюкозы и галактозы.

Классификация ИФА

В основу классификации методов ИФА положено несколько подходов:

1 — по типу реагентов, присутствующих на первой стадии ИФА:

В конкурентном ИФА на первой стадии в системе присутствуют одновременно анализируемое соединение и его аналог, меченный ферментом и конкурирующий за центры специфического связывания с ним;
Для неконкурентных методов характерно присутствие на первой стадии только анализируемого соединения и специфичных к нему центров связывания.

2 — по принципу определения исследуемого вещества:

Прямое определение концентрации вещества (АГ или АТ). Используют антитела к исследуемому веществу, соединенные со специфической меткой. В этом случае метка будет находиться в образовавшемся специфическом комплексе АГ-АТ. Концентрация определяемого вещества будет прямо пропорциональна регистрируемому сигналу;

Непрямое определение концентрации вещества – по разности общего числа мест связывания и оставшихся свободными центров связывания. Концентрация определяемого вещества при этом будет возрастать, а регистрируемый сигнал снижаться, следовательно, в данном случае прослеживается обратная зависимость от величины регистрируемого сигнала.

3 — по типу результатов:

Конкурентный ИФА

На твердой фазе иммобилизованы специфические моноклональные антитела;
В лунки панелей вносят в известной концентрации антиген, меченный ферментом, и исследуемый образец. Параллельно в соседних лунках ставят положительный и отрицательный контроли. Для построения калибровки используют стандартный немеченый антиген в различных разведениях. Проводят инкубацию и отмывку;
Добавляют субстрат, инкубируют, останавливают реакцию при развитии оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества обратно пропорциональна оптической плотности.

Конкурентный ИФА для определения антител: искомые антитела и меченые ферментом антитела конкурируют друг с другом за антигены, сорбированные на твердой фазе.

Неконкурентный «сэндвич» – вариант ИФА

Основным достоинством метода является высокая чувствительность, превосходящая возможности других схем ИФА.

На твердой фазе иммобилизованы моноклональные антитела или аффинно-очищенные поликлональные антитела;
В лунки панелей вносят исследуемый образец, параллельно ставят положительный контрольный образец и отрицательный контрольный образец в различных разведениях. Инкубируют и отмывают;
В лунки вносят меченные ферментом моноклональные или поликлональные антитела —конъюгат. После инкубации проводят отмывку для удаления несвязавшихся антител;
Вносят субстрат, инкубируют. Реакцию останавливают при достижении оптимального окрашивания в лунках с положительным контролем;
Проводят учет результатов на ИФА-ридере. Концентрация определяемого вещества прямо пропорциональна оптической плотности.

Качественный анализ часто используют при скрининговых исследованиях и диагностике инфекционных заболеваний. Результат исследования определяется при сравнении его оптической плотности с расчетной величиной критической оптической плотности (ОПкрит., «Cut-off»).

Формулу для расчета «Cut-off» указывают в инструкции к тест-системе. В расчете «Cut-off» могут участвовать как усредненные значения оптических плотностей положительных и отрицательных контролей, так и оптическая плотность специального контрольного образца — контроля уровня среза.
Если оптическая плотность образца выше, чем Cut-off, образец считается положительным на специфические антитела.

Для полуколичественного варианта проведения методики рассчитывают отношение между средней оптической плотностью образца и оптической плотностью Cut-off.

Образцы рассматриваются как:

положительные, если отношение более 1,1;
сомнительные, если отношение 0,9–1,1;
отрицательные, если отношение менее 0,9.

Сомнительные результаты анализа нельзя однозначно интерпретировать и для уточнения результата необходимо повторить обследование через 1–2 недели.

Целью любого лабораторного анализа является идентификация и определение концентрации искомого вещества. В современной медицине для этого широко используются методы молекулярной диагностики, в основе которых лежат иммунологические подходы или методы обнаружения специфической ДНК. К иммунологическим методам в первую очередь относят иммуноферментный анализ (ИФА). В плане обнаружения ДНК наибольшее распространение получил метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Эти распространенные методы широко используются для определения антител, антигенов, ДНК.

Открытие ИФА и ПЦР стало возможно благодаря ряду открытий в области иммунологии и молекулярной биологии в 60-80-годы прошлого века.

ИФА — метод выявления антигенов или антител, основанный на определении комплекса антиген-антитело за счет:

предварительной фиксации антигена или антитела на подложке;
добавления исследуемого образца и связывание фиксированных антигена или антитела с антигеном-мишенью или антителом-мишенью;
последующего добавления антигена или антитела, меченного ферментативной меткой с ее детекцией с помощью соответствующего субстрата, изменяющего свою окраску под действием фермента. Изменение цвета реакционной смеси свидетельствует о присутствии в образце молекулы-мишени.Определение продуктов ферментативных реакций при исследовании тестируемых образцов проводят в сравнении с контрольными пробами.

В середине 60-х годов для идентификации и локализации антигенов в гистохимических препаратах и выявления полос преципитации в иммунодиффузионных и иммуноэлектрофоретических методах в качестве высокочувствительной метки было предложено использовать молекулы ферментов. Являясь мощными химическими катализаторами, ферменты способны эффективно осуществлять наработку легко детектируемого продукта, что делает возможным определение ферментной метки в весьма малых концентрациях. На протяжении последних двух десятилетий иммуноферментные методы анализа интенсивно развивались как в теоретическом, так и практическом плане и к настоящему времени они сформировались в самостоятельное научное направление, имеющее важное прикладное значение. Использование твердых носителей для сорбционной или ковалентной иммобилизации антител с последующим специфическим связыванием анализируемого соединения на иммуносорбенте и выявлением образовавшихся иммунокомплексов с помощью меченных ферментами компонентов положило начало методам твердофазного (гетерогенного) иммуноферментного анализа. Впервые такой анализ провели в 1971 году Е. Энгвал и П. Перлман для детекции IgG фракции иммуноглобулинов, К. Ван Веемен и А. Шурс для обнаружения эстрогенов.

Использование твердой фазы позволяет упростить процесс разделения компонентов реакции за счет иммобилизации одного из компонентов на твердой фазе и удаления субстанций, не участвующих в реакции. Основными требованиями, предъявляемыми к твердой фазе при проведении ИФА, являются устойчивость к растворам, используемым в реакции, и высокая специфическая емкость (т. е. способности сорбировать на своей поверхности антитела или антигены в количествах, необходимых для проведения реакции в сочетании с как можно меньшей неспецифической сорбцией белков из исследуемых образцов и коньюгатов). Наиболее распространенным способом иммобилизации антител или антигенов является адсорбция, процесс, при котором часть молекул за счет ионных и гидрофобных взаимодействий, а также образования водородных связей, присоединяется к поверхности твердой фазы. В качестве твердой фазы в большинстве коммерческих диагностических наборов используют полистироловые 96-ти луночные планшеты или полистироловые шарики.

Для ферментативной метки коньюгата могут быть применены разнообразные ферменты: пероксидаза хрена, щелочная фосфотаза, бета-галактозидаза, глюкозооксидаза и др. В качестве субстратного реагента также применяются разнообразные хромогенные вещества, продукты окисления которых как раз и регистрируются фотометрически при определенных длинах волн (волновой диапазон 340-750 нм).

Широкое использование стандартной конфигурации 96-луночного планшета позволило унифицировать оборудование, необходимое для проведения иммуноферментного анализа.

В 1972 г. К. Рубенштейн с сотр. разработали новый подход, заключающийся, в проведении всего анализа без использования твердой фазы. Метод получил название гомогенного ИФА и был основан на учете различий каталитических свойств ферментной метки в свободном виде и в иммунохимическом комплексе. В дальнейшем термин «гомогенный иммуноанализ» стал применим к любой системе иммуноанализа, в которой специфическая реакция взаимодействия антигена с антителом и определение глубины ее протекания осуществляются в гомогенном растворе.

Отсутствие стадии разделения свободного и меченого анализируемого соединения привело к сокращению времени проведения анализа до нескольких минут. Это исключительно важное обстоятельство позволило разработать диагностические иммуноферментные тест-системы экспресс-определения биологически активных соединений, нашедшие широкое применение в химической токсикологии, фармакологии, эндокринологии.

Основной принцип ИФА – специфическое связывание антитела с мишенью. Для получения антител первоначально использовали иммунизацию животных (обычно кролика) очищенным белком. Однако в этом случае получали смесь антител к разным антигенным детерминантам молекулы-мишени. Такую смесь антител называют поликлонильным препаратом. Использование поликлональных антител имело два существенных недостатка: 1) содержание отдельных антител в поликлональном препарате может варьировать от одной партии к другой; 2) поликлональные антитела нельзя применять, если необходимо различать сходные мишени, т.е. когда патогенная (мишень) и непатогенная (не-мишень) формы различаются единственной детерминантой.

Этим объясняются многочисленные «перекрестные» положительные реакции, которые приводят к ошибочным диагнозам.

Еще один серьезный недостаток: для получения антител каждый раз необходимо заново иммунизировать животных и очищать выделенную сыворотку. Это стоит немалых денег.

Благодаря разработке метода получения моноклональных антител (МАТ) с помощью техники гибридом стало возможно получение препаратов антител к одной антигенной детерминанте.

С.Мильштейн и Г.Келер за разработку техники получения гибридом, вырабатывающих МАТ с запрограммированной специфичностью, получили в 1984 году Нобелевскую премию в области медицины и физиологии. Они рассчитывали использовать гибридомы лишь для изучения генетики антител, а результат привел к подлинному буму. В основу метода положен давно известный принцип гибридизации (слияния) соматических, неполовых, клеток с последующим выделением и культивированием необходимого гибридного клона. Для слияния используют клетки двух видов. Первые — плазмоцитомы (опухолевые плазмоциты) из линий, культивируемых в искусственных условиях, invitro. Как и все злокачественные клетки они интенсивно размножаются без всякого внешнего стимула. Другие клетки —иммунные лимфоциты. Они несут в себе способность синтезировать и выделять необходимые антитела. Однако в пробирке эти клетки существуют лишь несколько дней.

Образовавшийся при слиянии двух клеток гибрид наследует признаки обоих «родителей».

К настоящему времени получены тысячи разнообразных МАТ, несколько тысяч гибридом, в т.ч. на 600 вирусных антигенов.

Преимущества МАТ:

Главная особенность МАТ — чрезвычайная моноспецифичность (против одной антигенной детерминанты) и абсолютная однородность.
Возможность многократного получения в течение длительного времени (воспроизводимость).
Неограниченное количество получаемых антител.

По специфичности и чувствительности МАТ достигают значений, предельных для живой природы. Отсюда возможность использования для анализа антигенов не высокой степени чистоты.

Метод ИФА находится в постоянном развитии. С одной стороны, расширяется число объектов исследования, с другой - углубляются и совершенствуются методы самого анализа. Это приводит к тому, что упрощается схема анализа, сокращается время его проведения, уменьшается расход реагентов. Идет постоянный поиск все новых и новых веществ, используемых в качестве маркеров. Все возрастающее влияние на ИФА оказывают химия высокомолекулярных соединений, клеточная и генная инженерия, под влиянием которых меняются технологии получения реагентов для ИФА.

Еще одним из важнейших современных методов диагностики заболеваний внутренних органов является ДНК-диагностика методом полимеразной цепной реакции.

ПЦР позволяет найти в исследуемом материале небольшой участок генетической информации, заключенный в специфической последовательности нуклеотидов ДНК любого организма среди огромного количества других участков ДНК и многократно размножить его. ПЦР – это "in vitro" аналог биохимической реакции синтеза ДНК в клетке.

ПЦР — это циклический процесс, в каждом цикле которого происходит тепловая денатурация двойной цепи ДНК-мишени, последующее присоединение коротких олигонуклеотидов-праймеров и наращивание их с помощью ДНК-полимеразы путем присоединения нуклеотидов. В результате накапливается большое количество копии исходной ДНК-мишени, которые легко подаются детекции.

Открытию полимеразной цепной реакции сопутствовало развитие молекулярно-биологических технологий.

Первые данные о химических своиствах ДНК появились в 1868 г. К началу 50-годов ХХ в. было установлено, что ДНК – это линейный полимер, состоящий из нуклеотидов, состоящие из азотистого основания, пентозы и фосфатной группы. Основания бывают двух типов: пуриновые – аденин и гуанин и пиримидиновые – цитозин и тимин.

В 1953 г. Д. Уотсон и Ф. Крик пришли к выводу, что нативная ДНК состоит из двух комплиментарных полимерных цепей, образующих двойную спираль. Согласно модели Уотсона навитые одна на другую цепи удерживаются вместе водородными связями, образующимися между комплементарными основаниями противоположных цепей. При этом аденин образует пару только с тимином, а гуанин – с цитозином. Каждая цепь служит матрицей при синтезе новой цепи, а последовательность в синтезируемой (растущей цепи) задается последовательностью комплементарных оснований цепи-матрицы. В 1955 г. А. Корнберг открыл в клетках фермент, который назвал ДНК-полимеразой. ДНК-полимеразы обеспечивают репарацию и репликацию ДНК.

Эти ферменты способны удлинять короткие олигонуклеотидные затравки (праймеры), присоединяя к 3'-концу цепи ДНК дополнительный нуклеотид, но для этого необходимо, чтобы праймер был гибридизован, т. е. связан с комплементарной цепью ДНК, которая называется матрицей. Раствор, в котором происходит эта реакция, должен содержать нуклеозидтрифосфаты (они используются в качестве строительных блоков).

Нуклеотид, который присоединяет ДНК-полимераза, комплементарен основанию в соответствующем положении матричной цепи. Многократно повторяя эту реакцию, полимераза способна удлинять 3'-конец праймера до тех пор, пока не достигнет 5 ' -конца матрицы. В ходе репарации и репликации двойной спирали ДНК каждая цепь служит матрицей для синтеза другой цепи.

В 1962 г. американские ученные Дж.Уотсон, Ф.Крик и М.Уилкинс получили Нобелевскую премию по физиологии и медицине за установление молекулярной структуры нуклеиновых кислот и ее роли в передаче информации в живой материи.

В 1971 г. Клеппе и соавт. представили данные, касающиеся состава ингредиентов реакционной смеси и принципы использования коротких искусственно синтезированных молекул ДНК-праймеров для получения новых копий ДНК. Однако возможность использования ПЦР в плане наработки огромного количества копий нуклеиновых кислот еще не рассматривалась. Возможно, это было связано с техническими трудностями связанными с необходимостью трудоемкого синтеза праймеров.

В 70-х годах были открыты специальные ферменты – рестрикционные эндонуклеазы, которые расщепляют ДНК в специфических точках. Исследователи получили возможность "разрезать" ДНК на более короткие и более стабильные фрагменты, которые просто идентифицировать. При этом стало проще выделять и изучать фрагменты ДНК с находящимися в них генами.

В начале 80-х годов проблема с синтезом праймеров была разрешена благодаря разработке автоматических синтезаторов ДНК.

В 1966 г. был открыт новый вид термофильной бактерии Thermusaquaticus (Taq), содержащий термостабильную Taq-ДНК-полимеразу. К. Мюллис в 1983-1984 гг. провел ряд экспериментов по разработке ПЦР и первый начал использовать Taq-ДНК-полимеразу вместо ранее использовавшейся неустойчивой к высоким температуры ДНК-полимеразы. Это позволило ускорить работы по разработке полимеразной цепной реакции. Кроме того, К. Мюллис совместно с Ф. Фалуном разработал алгоритм циклических изменений температуры в ходе ПЦР. Открытие ПЦР стало одним из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние 20 лет. За разработку ПЦР-анализа К.Мюллис в 1993 г. был удостоен Нобелевской премии в области химии.

Результатом открытия ПЦР стало немедленное практическое использование метода. В 1985 г. была опубликована статья, в которой была описана тест-система для диагностики серповидно-клеточной анемии на основе ПЦР. Начиная с 1986 г. К настоящему времени ПЦР посвящено более 10000 научных публикаций. Перспективы использования ПЦР представляются более чем впечатляющими.

В заключение хотелось бы сказать, что создатели любого диагностического метода должны стремиться к тому, чтобы он был: высокоспецифичным; высокочувствительным; достаточно простым и позволяющим получать однозначные результаты; иметь приемлемую стоимость исследования. ИФА и ПЦР сочетают эти качества в высокой степени.

Читайте также: