Амплисенс вич монитор frt для каких анализаторов
Обновлено: 26.04.2024
Концентрация РНК ВИЧ в плазме крови (вирусная нагрузка) является одним из важнейших показателей для прогнозирования а также мониторинга противоретровирусной терапии [3, 5]. Противовирусные препараты, подавляя репликацию ВИЧ, приводят к снижению концентрации вируса в плазме крови. Поэтому, изучая изменение концентрации РНК ВИЧ в процессе лечения, можно судить об эффективности терапии уже через от ее начала [3].
Существует несколько подходов для количественного определения РНК ВИЧ: полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией изотермальная амплификация (NASBA) и разветвленная (bDNA). В России используется только ПЦР, и до последнего времени для количественного определения РНК ВИЧ применялась фирмы Рош» (Швейцария) «Amplicor Вместе с тем высокая стоимость исследования значительно ограничивала использование данной поэтому разработка доступного по цене отечественного аналога стала актуальной проблемой.
Разработанная в 1999 г. отечественная «АмплиСенс ВИЧ Монитор» производства Центрального НИИ эпидемиологии МЗ РФ, отличаясь низкой себестоимостью, продемонстрировала высокие аналитические показатели [1]. В связи с нарастанием эпидемии в России внедрение данной в клиническую практику стало важной задачей на пути улучшения качества жизни пациентов.
Целью настоящей работы являлось проведение расширенных клинических испытаний «АмплиСенс ВИЧ Монитор» для определения диагностической ценности отечественной по сравнению «Cobas Amplicor Monitor v. 1.5».
Материалы и методы
Отрицательная контрольная группа состояла из 106 образцов цельной крови от лиц, у которых подтверждено отсутствие с помощью иммуноферментного анализа.
Взятие крови и подготовка ее к анализу. Кровь забирали утром натощак в пробирку ЭДТА из расчета 1:20. В течение 6 часов с момента взятия крови отбирали плазму. Для этого цельную кровь центрифугировали при в течение 20 минут. Хранили образцы плазмы при температуре минус 700С.
Стандартный образец предприятия (СОП) ВИЧ. СОП, разработанный в ЦНИИЭ МЗ РФ, представляет собой криопреципитированную плазму крови человека, содержащую вирус иммунодефицита человека 1 типа в концентрации 53.000 копий РНК/мл. Концентрацию РНК в СОП определяли с помощью «Cobas Amplicor Monitor v. 1.5» фирмы Рош. СОП, разлитый в пробирки по 0,25 мл, хранили при температуре минус 700С. Из СОП сделано 2 последовательных разведения с использованием плазмы. Каждое разведение СОП разлито в пробирки по 0,25 мл и заморожено при температуре минус 700°С.
Определение концентрации РНК ВИЧ. Концентрацию РНК ВИЧ определяли согласно прилагаемой инструкции. Заявленные характеристики тест-систем и процедура анализов были следующими:
1. Тест-система «Cobas Amplicor v. 1.5». Линейный диапазон измерения концентрации РНК ВИЧ от 400 до 750.000 копий РНК/мл. РНК выделяли из 200 мкл плазмы крови путем высаживания изопропанолом. Затем РНК элюировали в 400 мкл и 50 мкл добавляли в амплификационную смесь. Амплификацию и детекцию продуктов ПЦР осуществляли автоматически, используя анализатор Cobas Amplicor Рош», Швейцария).
2. Тест-система «АмплиСенс ВИЧ Монитор». Линейный диапазон измерения концентрации РНК ВИЧ от 500 до 800.000 копий РНК/мл. РНК выделяли из 100 мкл плазмы крови путем сорбции на силикагеле. Очищенную РНК элюировали в 40 мкл и 25 мкл добавляли в амплификационную смесь. Амплификацию проводили на амплификаторе GeneAmp PCR System 2400 («Applied Biosystems», США). Детекцию продуктов амплификации проводили методом гибридизационно-ферментного анализа в лунках микропланшета, сенсибилизированного
3. Тест-система «LCx HIV RNA Quantitative assay» («Эбботт», США). Линейный диапазон измерения концентрации РНК ВИЧ от 178 до 5.000.000 копий РНК/мл. РНК выделяли из 100 мкл плазмы крови путем хроматографического разделения нуклеиновых кислот с помощью колонок производства QIAGEN (Германия). Очищенную РНК элюировали в 120 мкл и 50 мкл добавляли в амплификационную смесь. Амплификацию проводили на амплификаторе GeneAmp PCR System 480 («Applied Biosystems», США). Детекцию продуктов ПЦР осуществляли автоматически, используя анализатор LCx («Эбботт», США).
Предел линейного измерения концентрации РНК. Для оценки нижнего предела измерения «АмплиСенс ВИЧ Монитор» были исследованы разведения образцов плазмы крови с известной концентрацией РНК ВИЧ: концентрация РНК в исходных образцах была измерена с помощью «Cobas Amplicor v. 1.5»«.
Воспроизводимость. Три и три образца плазмы крови были протестированы в 10 повторах с помощью «АмплиСенс ВИЧ Монитор». Воспроизводимость оценивали, рассчитывая коэффициент вариации.
Специфичность. 106 образцов плазмы крови от здоровых лиц, в которых отсутствовали антитела к ВИЧ (НПО «Диагностические системы», Россия), были исследованы с помощью тест-системы «АмплиСенс ВИЧ Монитор». Также было протестировано 16 образцов, содержащих следующие микроорганизмы: вирусы гепатитов B, C, D, вирус вирусы простого герпеса 1 и 2 типа, цитомегаловирус, папиломавирусы 11, 18, 16, 6 типов, аденовирус, Chlamydia trachomatis, Chlamydia psittaci, Coxiela burneti, Rickettsia prowazekii. Специфичность оценивали по формуле: число отрицательных результатов/общее число образцов из контрольной группы 100%.
Степень совпадения количественных результатов. Для оценки сопоставимости количественных результатов было протестировано 72 образца плазмы крови пациентов, 10 образцов коммерческой панели субтипов СОП ВИЧ и его разведения (7 образцов), разведения международного стандарта (3 образца). Результаты, полученные с помощью двух «Cobas Amplicor Monitor v. 1.5» и «АмплиСенс ВИЧ Монитор», считали совпадающими, если разница между ними не превышала 0,5 lg. Корреляцию результатов, полученных с помощью двух оценивали, рассчитывая коэффициент корреляции по Спирмену.
Оценка эффективности противовирусной терапии. Образцы плазмы крови от 15 пациентов, получавших противоретровирусную терапию, были протестированы с помощью «Cobas Amplicor Monitor v. 1.5» и «АмплиСенс ВИЧ Монитор. Анализируемые образцы плазмы крови были взяты от пациентов до начала лечения и через 1 месяц лечения. Эффект противовирусной терапии оценивали по изменению концентрации РНК ВИЧ в процессе лечения (в логарифмических единицах) [3].
Читайте также: